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PCR监测PRRSV转运生物安全性不足

Source:adminAuthor:阿诚 Addtime:2018/12/18 Click:
生猪
运输生物安全越来越受到重视,因为有证据表明受污染的牲畜拖车是在畜群之间传播病毒的重大风险。但是,确认生物安全合规性和灭活病毒有效性的可靠测试一直是一项挑战。
 
PCR测试通常用于监控拖车卫生和去污,但结果可能难以解释。“例如,PRRSV的阳性PCR检测不会告诉您病毒是否具有传染性,或者它是否存在但是已经停用,”爱荷华州立大学(ISU)兽医学生Rita Neat说。“所以,你无法判断你的生物安全措施是否有效,这意味着你只能对消极测试充满信心。”
 
她设计了一项研究,以评估洗涤,消毒和热辅助干燥和去污(TADD)协议是否会持续产生PRRSV的阴性PCR测试,可用于监测拖车生物安全合规性。1
 
复制传输设置
在这项研究中,她使用了144个金刚石板铝托盘(4英尺x 4英尺x 1/2英寸)来复制牲畜拖车的地板。托盘被2mL磷酸盐缓冲盐水(PBS)或PRRV阴性粪便污染,然后掺入2mL PRRSV(VR-2385)。阴性对照接受未加标的PBS或粪便。所有托盘都作为预处理措施进行擦拭。
 
下一阶段涉及48个治疗组,每组三个重复。评估的消毒剂包括:
 
在美国(许可干预加速过氧化氢(AHP)消毒剂®在1:16或1:64稀释)。
AHP法消毒剂在加拿大(行货为准®在1:40稀释)。
季铵和戊二醛组合消毒剂(协同® 256稀释:1)。
阴性对照接受假消毒剂(PBS)
消毒剂的接触时间为-10°C(冬季造型)或20°C(夏季造型)5分钟或60分钟。为了在田间条件下模拟TADD,然后将所有托盘加热至71℃并保持10分钟。
 
在所有托盘上收集治疗后拭子,并将其与治疗前拭子一起送至ISU兽医诊断实验室进行PRRSV的定量实时PCR。
 
需要PCR替代品
至于结果,所有治疗组都恢复了PRRSV的PCR阳性,但并非所有的重复都返回PCR阳性,Neat指出。阴性对照结果为负面。消毒剂接触时间或温度没有产生显着结果。
 
该图表显示了消毒剂组的治疗后循环阈值(Ct)。Ct值在Y轴上找到,红线表示37 Ct截止值,这表示阴性测试。只有加拿大AHP 1:40组的重复检测结果为阴性,但并非一个治疗组始终为阴性。在对洗涤,消毒和TADD程序进行建模后,所有治疗组均恢复阳性。
 
“消毒剂和暴露介质 - 粪便或PBS - 确实对PRRSV从治疗前到治疗后基因组拷贝的减少有影响,”Neat补充说。“但是,我没有发现洗涤,消毒或TADD条件产生一致的阴性PCR结果。因此,为了监测拖车污染,去污和卫生协议,应探索PCR的替代方案。“